miércoles, 9 de julio de 2008

perfil lipidico

UNVERSIDAD DE ORIENTE
NUCLEO BOLIVAR
ESC. CS. DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
ASIGNATURA: LAB. DE BIOQUIMICA CLINICA.



PROFESOR: BACHILLER:
GERMAN GUZMAN. Fanny Rodríguez.
CI. 16648573
CIUDAD BOLIVAR, JUNIO DE 2008.

INTRODUCCION

En la realización de un perfil lipidico de determina el colesterol total y sus fracciones , así como los triglicéridos en la rutina diaria del laboratorio clínicoEl colesterol es un esteroides que se encuentra distribuido en casi todas las membranas celulares del organismo animal especialmente en tejido nervioso.
La mayor parte del colesterol del organismo se origina por síntesis (≈1g/dia) y una pequeña cantidad (≈0.3g/dia) es suministrado por los alimentos de la dieta, principalmente carne, hígado, sesos yema de huevos.Se sintetiza principalmente en hígado, corteza suprarrenal, piel e intestino. En el organismo se encuentra bajo dos formas químicas: colesterol libre y colesterol esterificado e su grupo 3-OH con ácidos grasos de cadena larga.
En el plasma un 25% de colesterol total se encuentra en forma libre y un 75% en forma esterificada. El colesterol es transportado como lipoproteínas encontrándose la proporción mas alta de colesterol en las LBD ( lipoproteínas de baja densidad ) las cuales se forman a partir de LMBD ( lipoproteínas de muy baja densidad ) y una pequeña proporción en las LAD ) lipoproteínas de alta densidad) la cantidad de colesterol en los quilomicrones es mínima y representa el colesterol suministrado por la dieta.El colesterol tienes funciones muy importantes en el organismo ya que es uno de los componentes estructurales de las membranas celulares y además es precursor de hormonas esteroideas, sales biliares y vitamina d.Loa valores de colesterol normales varian en cierto grado con la edad y el sexo. en lactantes es frecuente encontrar cifras normales de 60mg/dl como termino medio, pero estos valores aumentan y en la pubertad se aproximan a los del adultos .con respecto al genero los niveles de colesterol son mas altos que en la mujer, los estrógenos tienden a disminuir el colesterol plasmático.
En el embarazo en la segunda mitad de gestación se observa un aumuento del colesterol plasmático en un 30% aproximadamente por encima del valor normal.finalmente el estre y el equilibrio hormonal afectan los niveles normales de colesterol.
Valores superiores e inferiores se observan





DETERMINACION DE LABORATORIO.
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL ENZIMÁTICO. (LABORATORIOS BIOGAMMA,CA)Fundamento:La determinación de Colesterol total esta basada en el procedimiento enzimático descrito por Allain, donde la colesterol esterasa (CE) hidrolizan los esteres de colesterol a colesterol libre y ácidos grasos. En presencia de oxigeno, el colesterol libre es oxidado por la colesterol oxidasa (CO) a cholest-4-en-3-one y peróxido de hidrogeno. Cuando el fenol esta oxadativamente acoplado con 4-aminoantipirina en la presencia de peroxidasa (HPO), y peróxido de hidrogeno se produce un cromóforo de quinoneimina. La intensidad del color producido es proporcional a la concentración de colesterol y se mide colorimétricamente a cerca de 500nm.
Ésteres de colesterol -----CE------- colesterol + ac. GrasosColesterol + O2 ------------CO------- Colest-4-en-3-one + H2O22H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol ----------HPO----- quinonenica + 4H2O
La separación del HDL-colesterol, esta basada en la separación en la selectividad de los iones fosfotungstico y magnesio para precipitar todas las lipoproteínas con excepción del HDL-colesterol. Después de la centrifugación el HDL-colesterol contenido en el líquido sobrenadante, se determina con el mismo método que se determino el colesterol total.Muestra.
Las muestras mejor recomendadas son Suero recién extraído y no hemolizado. También se pueden usar plasma obtenido con EDTA.
Se recomienda un ayuno de 12-14horas antes de la extracción de la muestra, sobre todo si también se le va hacer la determinación de triglicéridos a la misma muestra. Sin no cumplen este requisito no deben usarse para determinar colesterol y HDL-Colesterol.

El colesterol en suero o plasma es estable:-Por 5 días a temperatura ambiente.-2 semanas refrigeradas-6 meses si se congela.NOTA: el HDL-colesterol no debe congelarse para es estable hasta 5 días refrigerado.Limitaciones del Método.
-Niveles de ácido ascórbico tan altos como 10 mg %, No Interfieren en la prueba-El presente método de Colesterol, á demostrado ser lineal hasta 500 mg/dl. Mas allá de este límite, las muestras deberán diluirse con solución salina (0,85%) y ensayadas nuevamente. El nuevo resultado deberá multiplicarse por el factor de dilución.
Procedimiento del método.
1.- Se marcaron 3 tubos: una para la muestra (M), otro para el estándar (St) y otro para el blanco reactivo (BR).2.- A cada tobo marcado se le agrego 1 ml de reactivo de colesterol y lleve a temperatura de reacción.3.- Se pipetea 10ul (0,010ml) de cada muestra o 50ul de sobrenadante de HDL-colesterol, al tubo de muestra. Se tapa y mezcla por inversión.4.- Se pipetea 10ul de estándar de colesterol y se agrega en el tubo rotulado para el estándar. Se tapa y mezcla por inversión.5.- Se incuban todos los tubos a 37º C por 5 min o 15 min a temperatura ambiente.6.- Después de la incubación se mezclan todos los tubos por inversión y lea dentro de los 30 min siguientes.7.-Leer a 500nm. Se lleva a 0 con el blanco reactivo.

Técnica.
· Tubo Mx: 10 ul de Muestra.
· Tubo St: 10 ul de Standard.
· Tubo blanco reactivo: 1ml de Mx, 1 ml de Standard, 1 ml de blanco reactivo.


DETERMINACIÓN DE HDL-C
Para determinar los valores de HDL-c, se deben utilizar 50ul del sobrenadante obtenido por este procedimiento del colesterol total, en la técnica descrita anteriormente.1.- Se marca el tubo de la muestra que se va a ensayar.2.- Pipetea 500ul al tubo.3.- Se agrega 50 ul de HDL- precipitante al tubo y poner en un vortex por 10 seg.Entre estos reactivos precipitantes son una mezcla del ácido fosfotungstico con hidróxido de sodio y cloruro magnesio con sulfactante. Que precipitan a las LDL y VLDL (lipoproteínas de muy baja densidad) mientras que las HDL permanecen en solución.4.-Se centrifuga a alta velocidad por 10 min para obtener un liquido sobrenadante bien claro.5.- Se utilizan 50ul del sobrenadante y 50ul del estándar de HDL-c para hacer el procedimiento del colesterol total.Técnica.Muestra: 0.050ml de Mx.Estándar: 0.050ml de ST.Reactivo: 1ml de Mx, 1ml de ST, 1ml de banco reactivo.Mezclar e Incubar 5 min a 37ºC (ó 10 min a temperatura ambiente).Leer la absorbancia a 505 nm.Limitación del método.Muchos anticonceptivos orales hacen disminuir los valores de HDL e incrementar los niveles de LDL. Los estrógenos han reportado efectos inversos.


DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDO (CASA COMERCIAL CHEMROY).
FUNDAMENTO:
Para establecer el diagnostico de hiperlipoproteinemia primaria o secundaria, es útil la cuantificación de triglicéridos en conjunto con otros lípidos. También es útil para dar seguimiento a la diabetes mellitus, nefrosis, obstrucción biliar y variar anormalidades metabólicas que resultan de disturbios endocrinos.
1.- El glicerol y los ácidos grasos se forman en una primera etapa por la acción de la lipasa sobre los triglicéridos.
2.- El glicerol se fosforila por la adenosin-5-trifosfato (ATP) para producir glicerol-3-fosfato (G-3-P) y adenosin 5-difosfato (ATP) para producir glicerol-3-fosfato (G-3-P) y adenosin 5-difosfato (ATP) en una reacción catalizada por la glicerol-kinasa (GK).
Glicerol + ATP-----GK--------- G-3-P + ADP
3.- La G-3-P es oxidada por la gliceril fosfato oxidasa (GPO) produciendo deshidroxiacetona fosfato (DAP) y peróxido de hidrógeno.
G-3-P + O2 --------GPO------ DAP + H2O2
4.- Los peróxidos reaccionan con 4-aminoantipirina y 4-clorofenol bajo la influencia catalítica de la peroxidasa (POD) para formar quinoneimina.
2H2O2 + 4-amionopirina ----POD----- quinoneimina + HCL + 4H2O
El factor aclarador lipemico (LCF) es una mezcla de aditivos especialmente diseñado por Biocheminal Trade integrados dentro del reactivo de triglicéridos para ayudar a minimizar las interferencias debidas a la lipemia.
Muestra-La heparina y EDTA son los anticoagulantes de elección.-No deben usarse fluoruros ni oxalatos. Separa el suero o el plasma-Los TG son estables por 10 días a 2-8’C-No deje las muestra a temperatura ambiente, ya que los fosfolipidos pueden hemolizarse liberando glicerol libre, falsamente aumentados los TG
Sustancias interferentes
-No debe usarse material que contenga glicerina-Muestras hemolizadasProcedimiento y técnica.
Muestra: 10 ul de Mx.Reactivo: 1ml de Mx, 1 ml de ST, 1 ml de reactivo blanco.Estándar: 10 ul de STIncuban todos los tubos por 5 min a 37º C, o a temperatura ambiente 10 min.Leer a 500nm antes de 15 minutos. Se lleva a 0 abs con el blanco reactivo.
CALCULOS DE LOS DIFERENTES ANALITOS PROCESADOS.
COLESTEROL:
[St]=200mg/dlLectura del st= 0,153Lectura de la muestra= 0,100Fc = [st] /lectuta del st.Fc: 200mg/dl / 0,153 abs= 1307,20 mg/dl[Colesterol]=Fc X lectura de la muestra[Colesterol] = 1307,20 mg/dl X 0,100= 130,7 mg/dl[Colesterol] = 131 mg/dl.
HDL-c:
[St] = 50 mg/dl.Lectura del st= 0,284.Lectura de la muestra= 0,133.Fc = 50mg/del / 0,284 = 176,06 mg/dl.[HDL-c] = 176,06 md/dl X 0,133 = 23,41 mg/dl[HDL-c] = 23 mg/dl.
TRIGLICÉRIDOS.
[St]= 200 mg/dl.Lectura del st= 0,280.Lectura de la muestra= 0,178[Triglicérido]= lectura de la muestra/ lectura del st X [st][Triglicéridos] = 0,178 / 0,280 X 200mg/dl = 127,14 mg/dl[Triglicéridos] = 127 mg/dl.
VLDL.[VLDL] = [triglicérido]/ 5.[VLDL] = 127 / 5 = 25,4 mg/dl[VLDL] = 25 mg/dl.
LDL[LDL] = [colesterol] – [HDL-c] – [VLDL][LDL] = 131 – 23 – 25 = 83 mg/dl
Colesterol total.
[Colesterol total]= [LDL] + [VLDL] + [HDL]
[Colesterol total] 83 + 25 + 23 = 131 mg/dl.
DATOS PARA EL REPORTE
PX: femenina
Edad: 29 años
VALORES DE REFERENCIA
· Colesterol total: 150 – 250 mg/dl
· VLDL: 16 – 36 mg/dl.
· HDL: 39 – 43 mg/dl.
· LDL: 83 – 140 mg/dl.
· Triglicéridos: 50 – 140 mg/dl.
Análisis: los valores obtenidos estan entre los valores de referencia


CONCLUSION
La detreminacion del perfil lipidico: Comprende determinación de: Lípido Método -Colesterol total Enzimático (Manual o Automático) -Triglicéridos Enzimático (Manual ó Automático) -HDL colesterol Directo (S.Homogéneo) . Con precipitación -LDL colesterol Calculado:Friedwald. Directo(revisión) -No HDL colesterol Calculado siTG>=200 mg/dl. ,igual LDL+VLDL Algunos incluyen: Col/HDL y LDL/HDL Fórmula de Friedwald: LDL= CT-(TG/5 +HDL). VLDL=TG/5 IMPORTANCIA: Determinación del Riesgo Coronario.CC: 1°causa de muerte en el mundo. Colesterol elevado (LDL) es causa de aterogénesis
En GENERAL A toda persona mayor de 20 años (ATP3 ),cada 5 años 2) ESPECÍFICO • Antecedentes fam. de DISLIPIDEMIA • Hipertensión • Diabetes Mellitus • Causas secundarias de hiperlipidemia • Evaluación del riesgo coronario se le debe realizar un análisis
La Interpretación del P. Lipídico y el riesgo coronario Analizar el perfil lipídico de acuerdo a los valores de referencia de Ø ATP III Determinar si existe dislipidemia ,qué tipo,si su causa( primaria o Ø Øsecundaria) Determinar el número de factores de riesgo coronario principales (exceptuando LDL y triglicéridos) Determinar el riesgo de evento coronario en años según Framingham. Framingham Determinar el nivel oØlos próximos 10 colesterol Determinar si el pacienteØcategoría de riesgo y el objetivo del LDL de vida o/i terapéutico Determinar laØrequiere tratamiento de cambio de estilo meta del colesterol no HDL si Tg>Ø= 200 mg/dl
Adicionalmente si es posible evaluar otrosØ factores de riesgo(III)
Analizar Perfil Lipídico: Valores de referencia <>=240 Alto <100>=190 Muy Alto
Valores de referencia <40>=60 Alto(Protector) (Restar 1FR) <150>=500 Muy elevado
Valores de referencia Colesterol no HDL <130>=200 mg/dl) 2 Hipertrigliceridemia aislada (TG >=200 mg/dl) 3 Hiperlipidemia mixta(Col y Tg >=200 mg/dl) B HDL baja (en riesgo)<40 mg/dl aislada o acompañando a un tipo de Hiperlipidemia Combinaciones posibles: A1, A2, A3, B, A1+B, A2+B. A3+B Pueden a su vez ser: Primarias o Secundarias (adquiridas)


bibliografia
BISHOP, Michael L. “Química clínica” 5 ed. 2007.
GONZALEZ, J. M. Bioquímica clínica. 1998.
KAPLAN, L. y Pesce, A. (1986). QUÍMICA CLÍNICA. Panamericana: Buenos Aires.